Выпуск модели 400 GT начался в 1966 году, и на нее устанавливался четырехлитровый 12-цилиндровый двигатель, ранее использовавшийся на последних двадцати трех экземплярах модели 350 GT. По сравнению со своим предшественником 400 GT подвергся рестайлингу, стал просторнее. В итоге он стал первым четырехместным суперкаром Lamborghini с полноценной посадочной формулой 2+2.